[實驗技術]PEI 細胞轉染

Polyethylenimine(PEI)轉染(Transfection)實驗

原理:
Polyethylenimine(PEI)為一個帶正電的分子，而他會以包覆的形式和DNA形成一個複合物，並且將欲送入的DNA送到細胞內表現。

60 mm dish scale (HEK 293T cells)

Day 0 晚上  細胞播種  3-4 x 10^5 cell/ dish （ 12 小時後 約80%滿）
Day 1 早上  準備轉染的Plasmid

材料 （per dish）：
Plasmid DNA 4 ug,
PEI 4 uL,
OPTI-MEM (or serum free medium) 400 uL
Mix well （ 10-15 sec x2 vortex)
靜置15 mins,
在靜置的時間內，更新細胞培養基（4 mL/dish）
以放射狀的方式，緩慢地將混合液加入細胞中，盡量避免傷害細胞
6小時後再次更換新的培養基 （觀察細胞狀態  若死細胞不多  可以隔天再換）

Day 2 Post-transfection for 24 hours (若轉染DNA載有GFP等螢光Taq, 應該可以看見      GFP訊號)
Day 3 Post-tranfection for 48 hours,
原則上轉染後，在30-48小時內表現量最大
基本上  在293T cells這類容易易轉染的細胞 約80%以上細胞有螢光訊號  轉染才算成功
若是FLAG, MYC 等非螢光蛋白  可進行西方點墨法 確認標的蛋白是否過度表現(overexpression)