Polyethylenimine(PEI)轉染(Transfection)實驗
原理:
Polyethylenimine(PEI)為一個帶正電的分子，而他會以包覆的形式和DNA形成一個複合物，並且將欲送入的DNA送到細胞內表現。
60 mm dish scale (HEK 293T cells)
Day 0 晚上 細胞播種 3-4 x 10^5 cell/ dish （ 12 小時後 約80%滿）
Day 1 早上 準備轉染的Plasmid
材料（ per dish） ：
Plasmid DNA 4ug ,
PEI 4uL ,
OPTI-MEM (or serum free medium) 400uL
Mix well（ 10-15 sec x2 vortex)
靜置15 mins,
在靜置的時間內，更新細胞培養基（4 mL/dish）
以放射狀的方式，緩慢地將混合液加入細胞中，盡量避免傷害細胞
6小時後再次更換新的培養基 （觀察細胞狀態 若死細胞不多 可以隔天再換）
Day 2 Post-transfection for 24 hours (若轉染DNA載有GFP等螢光Taq, 應該可以看見 GFP訊號)
Day 3 Post-tranfection for 48 hours,
原則上轉染後，在30-48小時內表現量最大
基本上 在293T cells這類容易易轉染的細胞 約80%以上細胞有螢光訊號 轉染才算成功
若是FLAG, MYC 等非螢光蛋白 可進行西方點墨法 確認標的蛋白是否過度表現(overexpression)
Polyethylenimine(PEI)為一個帶正電的分子，而他會以包覆的形式和DNA形成一個複合物，並且將欲送入的DNA送到細胞內表現。
60 mm dish scale (HEK 293T cells)
Day 0 晚上 細胞播種 3-4 x 10^5 cell/ dish （ 12 小時後 約80%滿）
Day 1 早上 準備轉染的Plasmid
材料
Plasmid DNA 4
PEI 4
OPTI-MEM (or serum free medium) 400
Mix well
靜置15 mins,
在靜置的時間內，更新細胞培養基（4 mL/dish）
以放射狀的方式，緩慢地將混合液加入細胞中，盡量避免傷害細胞
6小時後再次更換新的培養基 （觀察細胞狀態 若死細胞不多 可以隔天再換）
Day 2 Post-
Day 3 Post-
原則上轉染後，在30-48小時內表現量最大
基本上 在293T cells這類容易易轉染的細胞 約80%以上細胞有螢光訊號 轉染才算成功
若是FLAG, MYC 等非螢光蛋白 可進行西方點墨法 確認標的蛋白是否過度表現(overexpression)
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