Sodium dodecyl sulfate (SDS)
SDS為界面活性劑會破壞蛋白質的二級結構使其變性,並包覆變性蛋白質,使其帶有一致的負電荷(大約每兩個胺基酸一個SDS)和一致的形狀(長條形)。如果沒有SDS使其負電荷一致,可能會使有相近分子量的蛋白質,分布於不同的位置,此種電泳法為原態膠體電泳(Native-PAGE)。進行電泳時,分子量較小的較容易落下,相反的分子量較大的則卡在起點附近。雖然較大的電壓可以縮短實驗的時間,卻會得到較模糊的結果,因此實驗長達數個小時。
Dithiothreitol(DTT)
DTT的用途之一是作為巰基化DNA的還原劑和去保護劑。巰基化DNA末端硫原子在溶液中趨向於形成二聚體,特別是在存在氧氣的情況下。這種二聚化大大降低了一些偶聯反應實驗(如DNA在生物感應器中的固定)的效率;而在DNA溶液中加入DTT,反應一段時間後除去,就可以降低DNA的二聚化。
DTT也常常被用於蛋白質中二硫鍵的還原,可用於阻止蛋白質中的半胱氨酸之間所形成的蛋白質分子內或分子間二硫鍵。但DTT往往無法還原包埋於蛋白質結構內部(溶劑不可及)的二硫鍵,這類二硫鍵的還原常常需要先將蛋白質變性(高溫加熱或加入變性劑,如6M 鹽酸胍、8M 尿素或1% SDS)。反之,根據DTT存在情況下,二硫鍵還原速度的不同,可以判斷其包埋程度的深淺。
由於容易被空氣氧化,因此DTT的穩定性較差;但冷凍保存或在惰性氣體中處理能夠延長它的使用壽命。由於質子化的硫的親核性較低,隨著pH值的降低,DTT的有效還原性也隨之降低;而Tris(2-carboxyethyl)phosphine HCl(TCEP鹽酸鹽)可以作為低pH值條件下DTT的替代品,而且也比DTT更為穩定。
2018年8月12日 星期日
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