[實驗技術] 基因擴增技術

RT

PCR基本原理

PCR 常見問題與解決

Real time PCR [from the beginning]

絕對定量與相對定量（Absolute vs Relative quantification）

絕對定量分為兩種
1. Digital PCR method
不需要已知樣品，直接經由實際的PCR複製次數來決定基因表現量

2. Standard curve method
稀釋不同濃度的cDNA來建立濃度標準曲線，然後推斷受測樣品的相對濃度．
ex: 以10x系列（1, 0.1x, 0.01x ....）稀釋cDNA濃度，先進行qPCR反應，建立稀釋濃度與基因表現的標準曲線．之後受試樣品(在相同稀釋倍率下）進行qPCR，與標準曲線對照，求取基因表現差異．


相對定量
利用控制組的基因表現量做為基準線，分析受試樣品基因表現的變化量。
ex: 有興趣的是PPAR，就是比較控制組跟受試組的PPAR基因表現差異．